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免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告

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  作者: 刘春红
  
  新城疫是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性和毁灭性的传染病。新城疫流行于世界各国,在150多个国家和地区都有此病发生。随着高度集约化养鸡业的发展,新城疫的防治也备受关注。近年来,新城疫的流行趋势发生了变化,以发病率低、临床症状不明显、病理变化不典型、死亡率低、蛋鸡产蛋量下降为特征的非典型新城疫,使得新城疫的防治变得更加复杂和棘手。新城疫目前仍然是严重危害我国养禽业的主要疾病之一,造成的经济损失十分巨大。除了大量死亡的直接损失外,还因幸存者生长发育受阻、饲料转化率低、产蛋量下降、受精率和孵化率降低以及封锁隔离等措施花费的大量人力和财力所造成的间接经济损失。
  
  由于机体免疫机能状况等很多因素的综合影响,使新城疫疫苗接种效果不佳,甚至免疫失败,新城疫的发病次数仍然很高。再者,由于近十多年来养鸡业的蓬勃发展,使鸡场的数量巨增,星罗棋布,使疫病种类更加复杂化、病情程度更加严重。为了更加有效地防治鸡新城疫,疫苗免疫后鸡新城疫抗体效价监测,常作为免疫效果评价的重要依据。检测家禽血清中鸡新城疫抗体的方法有很多种,包括单向辐射免疫扩散试验、单向辐射溶血试验、琼脂扩散试验、鸡胚中和试验及蚀斑中和试验、酶联免疫吸附试验以及血凝抑制试验(HI)等,但常采用血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI)来定量测定鸡新城疫抗体。ELISA可以半自动化操作,其技术已经普及,并且ELISA与HI有很好的相关性。迄今为止,鸡红细胞血凝抑制试验仍不失为一种快速准确的试验手段。
  
  本次监测采用HI方法,对市某户新城疫疫苗已免疫鸡群的1000只100日龄育成鸡进行检验,并结合农户的叙述及实地考察,做出该鸡群新城疫疫苗免疫效果评价,以便有的放矢地预防和控制该养鸡场的新城疫。
  
  材料与方法
  
  材料
  
  抽检鸡 涿州市某蛋鸡场,从100日龄新城疫疫苗免疫育成鸡1000只中分别在100日龄和150日龄时随机抽取32只采血并分离血清。
  
  试剂和药品 鸡新城疫HA抗原、新城疫阳性和阴性血清,由中监所生产;氯化钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠、柠檬酸三钠、葡萄糖、柠檬酸。
  
  仪器微量震荡器 微量加样器、离心机、天平、手提式压力蒸汽消毒器、90oV型96孔血凝板、电冰箱。
  
  (pH7.0~7.2)磷酸缓冲盐水:
  
  氯化钠(GB1266-77)170克
  
  磷酸二氢钾(GB1274-77)13.6克
  
  氢氧化钠(GB-77)3.0克
  
  蒸馏水1000毫升
  
  高压灭菌,4℃保存,使用时作20倍稀释
  
  阿氏(Aisevers)液配置。
  
  葡萄糖2.05克
  
  柠檬酸钠0.8克
  
  柠檬酸0.055克
  
  氯化钠0.42克
  
  加蒸馏水至1000ml,加热溶解后调pH值至6.1,69kPa15min高压灭菌,4℃保存备用。
  
  方法
  
  鸡新城疫红细胞凝集(HA)试验参照文献,以微量法测试新城疫抗原HA价。
  
  1%鸡红细胞悬液的制备:采取3只成年无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血与等体积阿氏液混合,用1倍稀释液洗涤3次,每次均以1000r/分钟离心10分钟,洗涤后用1倍稀释液配成1%(V/V)红细胞悬液。4℃保存备用。
  
  HA试验:自左向右于96孔V型血凝板的每1孔中加1倍稀释液25μL;吸取25μL的抗原滴加到第1孔,用微量加样器充分混匀后移取25μL,加于第2孔,依此法从左向右进行倍比稀释至第11孔,从第11孔吸取25μL弃取,第12孔不加抗原作阴性对照;每孔再加25μL稀释液;每孔均加1%红细胞悬液25μL,置微量震荡器震荡2分钟,室温下(20℃)作用30分钟,将血凝板倾斜观察结果。
  
  结果判定:以100%凝集的最大稀释孔为新城疫抗原(HA)价,即一个凝集单位,不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。第12孔为对照应不凝集。(未完待续)
  

参考资料
[1].  免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告   http://shuju.aweb.com.cn/technology/2009/0821/3114094421270.shtml

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  • 更新时间: 2016-03-07